标题：iFluor 488-刀豆蛋白A(ConA)探针
【参数信息】英文名称：iFluor 488-Concanavalin A Conjugate；iFluor 488-ConA
中文名称：iFluor 488-刀豆蛋白A(ConA)探针；iFluor 488-刀豆球蛋白A缀合物；iFluor 488标记的刀豆凝集素A探针
适用仪器：荧光显微镜
推荐孔板: 黑色透明底板
Ex (nm)：491
Em (nm)：516
溶解性： 溶于DMSO
纯度：≥95%
储存条件：-20℃避光干燥
生产厂商：西安强化生物科技
展开剩余83%【简单概述】iFluor 488-刀豆蛋白A（ConA）探针是一种荧光标记的生物分子工具，由iFluor 488荧光染料与刀豆蛋白A（Concanavalin A, ConA）通过共价偶联制备而成。
该探针结合了iFluor 488的高亮度、光稳定性和低背景荧光特性，以及ConA对特定糖基结构的特异性识别能力，广泛应用于细胞生物学、糖生物学和医学研究领域。
iFluor 488-ConA探针是一种荧光标记的凝集素复合物，其核心成分为：
刀豆蛋白A（ConA）：作为特异性识别单元，靶向结合细胞表面的α-甘露糖/葡萄糖残基。
iFluor 488荧光团：作为信号输出单元，在激发光下发射绿色荧光，用于检测和量化结合事件。
该探针通常以冻干粉或溶液形式存在，需避光保存于-20°C，使用时溶解于缓冲液（如PBS）。
其作用机制基于ConA与糖基的特异性结合及荧光信号的产生：
特异性结合：ConA通过其糖结合结构域与细胞膜或糖蛋白上的α-甘露糖/葡萄糖残基结合，形成稳定的复合物。
荧光标记：iFluor 488通过共价键（如酰胺键）与ConA偶联，结合后可在激发光（~495 nm）下发射519 nm的绿色荧光，从而标记目标糖基化位点。
应用检测：结合后的荧光信号可通过流式细胞术、共聚焦显微镜或高内涵成像系统定量分析，用于研究糖代谢、细胞间相互作用或病原体侵染机制。
【常见问题】1. 荧光信号弱或检测不足
问题原因：探针浓度过低、孵育时间不足、缓冲液中缺乏必需的二价阳离子，或细胞表面糖基化目标表达量低。
解决方法：
优化探针工作浓度（通常建议 5–25 μg/mL 用于细胞标记），适当延长孵育时间（15–30 分钟）。
在缓冲液（如 PBS）中添加 1 mM CaCl2 和 1 mM MnCl2，以维持 ConA 的糖结合活性。
对于低丰度目标，可通过增加激光功率或曝光时间增强信号，但需避免饱和。
2. 背景荧光过高
问题原因：未结合的探针残留、非特异性结合、细胞自发荧光、或缓冲液中含竞争性糖类（如甘露糖）。
解决方法：
实验后彻底洗涤细胞（用预冷 PBS 洗涤 2–3 次），彻底去除未结合探针。
使用前离心探针溶液（例如 12,000 rpm，5 分钟），取上清避免聚集体导致的非特异性结合。
避免在缓冲液中添加血清或竞争性糖类；必要时可添加 2–10% 血清维持细胞健康，但需评估背景影响。
设置阴性对照（未染色样本）和竞争抑制对照（添加 10–100 mM 甲基-α-D-甘露糖苷），验证结合特异性。
3. 探针稳定性问题（聚集或降解）
问题原因：储存条件不当（如未避光、温度过高）、反复冻融，或溶剂（DMSO）浓度过高导致聚集。
解决方法：
探针储存于 -20°C 以下避光干燥环境，避免反复冻融（建议分装保存）。
使用前短暂离心并取上清液，确保探针分散均匀。
工作液需现配现用，避免长时间放置。
4. 光漂白或信号衰减
问题原因：长时间光照或成像导致荧光淬灭，尤其在使用高强度激光时。
解决方法：
iFluor 488 具有优良光稳定性，但仍建议避光操作（例如使用避光孵育箱），并优化成像条件（如缩短曝光时间、使用抗淬灭封片剂）。
避免 pH 敏感环境（iFluor 488 在 pH 4–10 范围内稳定，无需额外调节）。
5. 细胞毒性或形态异常
问题原因：探针浓度过高、孵育时间过长，或缓冲液成分不适（如缺乏血清）。
解决方法：
优化探针浓度至最低有效水平（通常 ≤25 μg/mL），避免过量使用。
在染色和洗涤缓冲液中添加 2–10% 血清，维持细胞健康状态。
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本试剂仅适用于科研实验，敬请知悉。
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